酶底物法检较脏水样中大肠菌群时的稀释问题

日常微生物检测中，当面临着水体污染严重的水样检测结果已超出检测限时，这时就需要我们对水样进行稀释。

目前《水与废水标准检测法》、《生活饮用水标准检验方法》中的多管发酵法、滤膜法或是酶底物法，就算是定量范围（1-2419MPN/100ml）的酶底物法面对较脏的地下水或者排污口的水样也需要稀释到100倍甚至1000倍。我们都知道，微生物实验的不稳定性，当我们进行稀释时，结果固然会有影响，我们要做的就是尽量减少误差。

1、实验步骤越少，结果偏差也会越小，所以酶底物法步骤少，会更有优势。

2、在做稀释时，应保证取样量大，譬如10倍稀释：取10ml原液+90ml无菌水配成100ml10倍稀释液①；若是要百倍千倍稀释，则需要进行梯度稀释，由①中的10倍稀释样再取10ml，再加90ml无菌水，此时完成了100倍的稀释。若是千倍稀释，则需要从100倍稀释样中再取 10ml进行稀释。

3、每次再去原液时，取样的均匀程度直接影响了后面的稀释结果，故我们在每次取样前必须充分摇匀。

4、为了使数据更加地稳定及接近真实值，建议每个梯度稀释做平行样。这时，我们可以设计成取20ml原液加180ml无菌水配成200ml样或者取30ml加270ml无菌水配成300ml10倍稀释样，以此往下做梯度稀释。若是未知样且浓度可能会很高的时候，我们建议这样去稀释，因为这样我们便可以保证每个梯度至少有一个样。若已经大概了解水样来源及浓度，可直接梯度稀释到我们要的浓度，并做2-3个平行样。

5、对于未知样需要进行浓度的摸索，无论是多管还是酶底物法，都会有较大工作量。前期的梯度稀释及每个梯度做平行样都是无法避免的，当我们后期对水样浓度有了把握后便可以直接稀释到某个浓度，这样就减少许多的工作量了。由于酶底物法是已灭菌可直接用的选择性培养 基，比起多管法会更加简便、不用洗大量的管子。另外滤膜法在做脏水时就完全不适合了。